那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于酶標(biāo)儀的使用方法。
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)檢測儀是酶聯(lián)吸附試驗(yàn)的專用儀器又稱微孔板檢測器??珊唵蔚胤譃榘胱詣?dòng)和全自動(dòng)2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來進(jìn)行分析。盡管酶標(biāo)儀的發(fā)展極為快速,種類繁多,功能也不斷加強(qiáng),但其根本的功用是不變的,即比色測定。
酶標(biāo)儀的使用方法
一、測定波長
目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經(jīng)HRP作用,分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí),DAB在450nm波長處有大吸收,當(dāng)pH值降為L0時(shí),大吸收波長移至492nm,同時(shí)摩爾消光系數(shù)變大,顯色加深,因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有大消光系數(shù),如果HRP量少,H:O:和TMB過量時(shí),則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此,450nm和492nm兩個(gè)波長是目前ELISA測定常用的。
酶標(biāo)儀有單波長和雙波長檢測功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長"就是使用一種對(duì)顯色具大吸收的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定;而“雙波長"則除了用對(duì)顯色具大吸收的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定外,同時(shí)用對(duì)特異顯色不敏感的波長如630nm進(jìn)行測定,酶標(biāo)儀后打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,好使用雙波長,且不必設(shè)空白孔。
二、測定的吸光度范圍
通常,酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標(biāo)儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現(xiàn)在基本上都做了拓寬,可達(dá)到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。
三、光學(xué)系統(tǒng)
酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導(dǎo)纖維,除測定通道外,有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道,每次測定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何,均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話,則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
四、檢測速度
酶標(biāo)儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時(shí)間。檢測速度快,有利于提高檢測的精密度,即避免由于測定過程中,因測定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。
五、震板功能
酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對(duì)ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對(duì)其進(jìn)行振蕩混勻,使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場上常見的酶標(biāo)儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié)。使用有震板功能的酶標(biāo)儀,在進(jìn)行ELISA測定顯色反應(yīng)完成加入終止劑后,可不必振蕩混勻,直接放人酶標(biāo)儀上測定即可。
六、溫育功能
溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動(dòng)地控制儀器內(nèi)部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能。
七、軟件功能
軟件功能是指酶標(biāo)儀所具有的對(duì)ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標(biāo)動(dòng)力學(xué)、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析并報(bào)告結(jié)果的功能。軟件功能是中上等酶標(biāo)儀的一個(gè)非常重要的功能。如果硬件方面區(qū)別不大,則軟件就成為判定酶標(biāo)儀優(yōu)劣的惟一指標(biāo)。對(duì)于用戶來說,好的軟件功能,對(duì)實(shí)際工作會(huì)有較大的幫助。ELISA定性測定,酶標(biāo)儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定“灰區(qū)"(即指測定吸光度處于cut-off周圍的一定區(qū)域,此區(qū)域內(nèi)結(jié)果應(yīng)為“可疑")的統(tǒng)計(jì)計(jì)算功能,不但方便了實(shí)驗(yàn)室工作人員,而且在某些特定的情況下,有很高的實(shí)用價(jià)值。有研究表明,四參數(shù)方程能較好地反映測定的劑量反應(yīng)曲線,適合于定量酶測定的曲線擬合。因此,如目的是定量測定,則在酶標(biāo)儀的軟件功能中,要有這種曲線回歸方程計(jì)算分析功能。其他諸如連點(diǎn)、直線等回歸計(jì)算,則可根據(jù)酶標(biāo)儀的應(yīng)用目的而定,如兼用于微量生化測定,則此類回歸計(jì)算就很有必要。
八、語言界面
通常進(jìn)口的中上等酶標(biāo)儀人機(jī)對(duì)話多采用英文。這對(duì)于某些基層實(shí)驗(yàn)室可能會(huì)存在語言方面的困難,從而難以限度地發(fā)揮酶標(biāo)儀的作用。為解決這方面的問題,已有一些酶標(biāo)儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的使用。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于酶標(biāo)儀的使用方法。
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